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穩(wěn)定轉染細胞株的構建

2010年11月24日 20:35:42人氣：3823來源：上海玉博生物科技有限公司

1. 2 穩(wěn)定轉染細胞株的構建

原理：

穩(wěn)定轉染，就是轉染的質粒DNA整合到宿主細胞染色體上，使宿主細胞可

長期表達目的基因及蛋白。需要在瞬時轉染基礎上對靶細胞進行篩選或者應用高轉染效率的病毒，根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥物進行細胞傳代，從而得到可穩(wěn)定表達目的基因的細胞系。

應用：

觀察目的基因及其表達蛋白在某種細胞中的功能（穩(wěn)定，可長期進行研究）

一般流程：

1） 篩選濃度測定：以10~14天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度

2） 細胞接種：轉染實驗前天接種細胞，各種細胞的平板密度依據(jù)各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉染當天細胞密度應達到60%~80%覆蓋

3） 細胞轉染（病毒、脂質體、電穿孔、FuGENE 6）

4） 利用質粒上含有的抗性選擇進行篩選

5） 鑒定篩選結果

前期需要準備：

l 構建好的外源基因載體

l 待轉染的細胞系（1×10⁶個細胞，可傳代，倍增時間小于48小時）以及細胞培養(yǎng)條件的說明

l 若需要檢測靶基因的表達變化，請?zhí)峁┫鄳贵w

結果呈現(xiàn)：

構建好的穩(wěn)定表達細胞系及相關的外源基因表達分析

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