羊源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒通用原則:

1, 先選擇好探針,然后設計引物使其盡可能的靠近于探針。

2, 擴增子的長度應不超過400bp,理想的*能在100-150bp內(nèi),擴增片斷約短,有效的擴增反應就越容易獲得。較短的擴增片斷也容易保證分析的一致性

3, 保持GC含量在20%和80%之間,GC富含區(qū)容易產(chǎn)生非特異反應,從而會導致擴增效率的降低,及在SG分析中非特異信號。

4, 為了保證效率和重復性,應避免重復的核苷酸序列,尤其是G(不能有4個連續(xù)的G)

5, 將引物和探針互相進行配對檢測,以避免二聚體和發(fā)卡結構的形成。

b),探針設計指導

1,在設計引物之前設計探針

2,探針的Tm值應在68-70℃之間,如果是目測探針,則要仔細審查GC富含區(qū)。

3,探針的5’端要避免有鳥an酸,5’G會有淬滅作用,即使被切割下來這種淬滅作用也還會存在

4,選擇C多于G的鏈作探針,G的含量多于C會降低反應效率,這時就應選擇配對的另一條鏈作為探針。

6, 探針應盡可能的短,不要超過30個bp。

7, 檢測探針的DNA折疊和二級結構。

小鼠神經(jīng)干細胞（EGFP標記）

人腦微血管內(nèi)皮細胞

人腦血管平滑肌細胞

人海馬神經(jīng)元

人少突膠質(zhì)細胞

人星形膠質(zhì)細胞

小鼠成纖維細胞（EGFP標記）

mCF, 小鼠心臟成纖維細胞

MN-c, 小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元

MN-h, 小鼠海馬神經(jīng)元

MSC, 小鼠雪旺細胞

MA, 小鼠星形膠質(zhì)細胞

MLF, 小鼠淋巴成纖維細胞

mRTEC, 小鼠腎小管上皮細胞

CSC, 小鼠心肌細胞

mEPC, 小鼠內(nèi)皮祖細胞-骨髓

MEF, 小鼠胚胎成纖維細胞

NSC，大鼠神經(jīng)干細胞

RN-h, 大鼠海馬趾神經(jīng)元

rEPC，大鼠內(nèi)皮祖細胞-骨髓

RN-c, 大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元

RN-s, 大鼠紋狀體神經(jīng)元

RSC, 大鼠雪旺細胞

RA, 大鼠星形膠質(zhì)細胞

RLF, 大鼠淋巴成纖維細胞

rRTEC, 大鼠腎小管上皮細胞

rCSC, 大鼠心肌細胞

RDFs, 大鼠真皮成纖維細胞

RLFs, 大鼠肺成纖維細胞

rCF, 大鼠心臟成纖維細胞

MN-h, 小鼠海馬神經(jīng)元

MN-s, 小鼠紋狀體神經(jīng)元

mOPC, 小鼠少突膠質(zhì)前體細胞

MA, 小鼠星形膠質(zhì)細胞

MLF, 小鼠淋巴成纖維細胞

mRTEC, 小鼠腎小管上皮細胞

CSC, 小鼠心肌細胞

小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSCs）

MEF, 小鼠胚胎成纖維細胞