確定色譜峰保留時間不穩(wěn)定的原因首先需要找出變化的模式。建議首先檢查泵和溶劑混合裝置。校驗泵是否工作正常，可以用量筒和秒表來測量流速。校驗流動相組成沒有變化，可以在流動相中加入跟蹤劑來觀察基線的變化。如果流動相組成是穩(wěn)定的，基線也應(yīng)該很穩(wěn)定。如果流動相組成有變化，你會觀察到基線的相應(yīng)變化。

1、一天之內(nèi)的進(jìn)樣保留時間一致，但是不同天數(shù)之間的保留時間變化

這種情況下，儀器本身不太可能有問題。保留時間變化zui有可能的原因是流動相組成的變化。在反相色譜中，保留因子k和流動相中有機(jī)溶劑的體積含量成指數(shù)關(guān)系。根據(jù)經(jīng)驗，如果有機(jī)溶劑含量誤差1%，那么保留時間的變化在5%到15%之間，典型情況在10%左右。建議仔細(xì)稱量有機(jī)溶劑，的配制流動相方法是用質(zhì)量稱量代替體積稱量。此外，流動相如何脫氣也可能導(dǎo)致保留時間的變化。的脫氣方法是使用真空超聲脫氣大約一分鐘左右，這會zui大程度的減少溶劑蒸汽的揮發(fā)。另一個方法是用氦氣流噴射，在流動相被氦氣平衡后，氦氣流必須被關(guān)閉，否則氦氣會帶走溶劑蒸汽，溶劑的組成會由于蒸發(fā)而發(fā)生變化。

2、色譜峰保留時間朝同一個方向漂移

如果所有色譜峰的保留時間都朝同一個方向漂移，很可能是溫度原因所致。根據(jù)經(jīng)驗，每℃的變化導(dǎo)致保留時間變化大約1%到2%左右。在通常情況下沒有什么問題，但是在許多地方空調(diào)和暖氣在周末的時候會關(guān)閉，然后會出現(xiàn)樣品在周末的保留時間會和平時不一樣。使用柱溫箱可以很好的避免這個問題。

3、其它原因

在反相色譜中，如果分析離子或離子化的樣品，保留時間會受到緩沖溶液的離子強(qiáng)度的影響，但是影響會很小，通?？梢院雎圆挥?。典型的狀況是緩沖液的摩爾數(shù)改變20%，保留時間變化約1%。由于緩沖液組分通常是稱量的，那么大的誤差是不會發(fā)生的。