揭示半固體瓊脂培養(yǎng)基促菌生長檢查方法

　　1.用于菌數(shù)計數(shù)的半固體瓊脂培養(yǎng)基促菌生長（靈敏度）檢查的方法：對每個不同批號的脫水培養(yǎng)基均應(yīng)進行靈敏度檢查（促菌生長檢查）。取預(yù)先制備好的瓊脂培養(yǎng)基平皿3~5個，用表面涂布法每塊平板表面接種30~100個試驗菌，同時用已知質(zhì)量保證的同型號培養(yǎng)基平皿3~5個（如較的如MERCK，DIFICOL產(chǎn)品）做對照試驗，待培養(yǎng)基表面的菌液被瓊脂培養(yǎng)基吸干或風(fēng)干后，將培養(yǎng)皿倒置于培養(yǎng)箱的使用溫度下培養(yǎng)48~72小時，（也可采用澆碟法進行）取出培養(yǎng)后的平皿點計菌落數(shù)。樣品培養(yǎng)基上的微生物數(shù)量應(yīng)不得低于對照培養(yǎng)基上微生物生長數(shù)量的70%。否則，需重新檢查，或該培養(yǎng)基被視為不符合促生長要求。

　　2.用于控制菌檢查的富集培養(yǎng)基的促菌生長（靈敏度）檢查的方法：對每個不同批號的脫水培養(yǎng)基均應(yīng)進行靈敏度檢查。每100ml培養(yǎng)基內(nèi)分別接入試驗菌小于100cfu，每個菌種接種兩瓶培養(yǎng)基，將接過種的培養(yǎng)基置于條件下培養(yǎng)。應(yīng)在16~18小時后可明顯觀察到培養(yǎng)基內(nèi)有微生物生長，則證明此培養(yǎng)基合格。

　　原則上無論是采用脫水培養(yǎng)基還是按相關(guān)處方配制的培養(yǎng)基，一旦制成成品培養(yǎng)基，則應(yīng)對每個配制批號培養(yǎng)基進行促菌生長（靈敏度檢查）試驗，以考察培養(yǎng)基的質(zhì)量。按脫水培養(yǎng)基的批號做靈敏度檢查是基于培養(yǎng)基的滅菌程序已經(jīng)經(jīng)過驗證。

　　如果實驗室使用的是商購的成品培養(yǎng)基，供應(yīng)商應(yīng)隨培養(yǎng)基提供相應(yīng)批次的培養(yǎng)基質(zhì)量檢測報告，報告包括培養(yǎng)基的PH值、無菌檢查結(jié)果和促菌生長（靈敏度）試驗結(jié)果等項目。建議在使用某一新的成品培養(yǎng)基（新供應(yīng)商或新培養(yǎng)基品種）時，應(yīng)至少考察三個不同批次的培養(yǎng)基質(zhì)量，只有三批質(zhì)量均合格方可使用該培養(yǎng)基。微生物限度檢查用成品培養(yǎng)基一旦初試確認合格后，可審查供應(yīng)商的質(zhì)檢報告，而不必每批再作無菌檢查和靈敏度檢查，但半年應(yīng)至少檢查一次，以復(fù)核其質(zhì)量。用于無菌檢查試驗的每批培養(yǎng)基，均必須按規(guī)定進行靈敏度檢查試驗，此規(guī)定同樣適用于實驗室自行配制的培養(yǎng)基。

　　建議在正式使用前即應(yīng)完成對培養(yǎng)基的質(zhì)量檢查。如果在進行靈敏度試驗的同時，也使用該培養(yǎng)基進行樣品檢查，那么，一旦培養(yǎng)基的無菌性或靈明度不符合規(guī)定，則檢驗結(jié)果應(yīng)無效。無論這些質(zhì)量控制檢查試驗何時完成，實驗室都必須在相關(guān)產(chǎn)品放行之前或檢驗報告發(fā)出之前，對所用培養(yǎng)基的無菌性及靈敏度試驗資料的完整性和合格予以確認。

　　靈敏度（促生長）檢查試驗用菌懸液，可用標準菌種制得，也可向具備適當資質(zhì)的供應(yīng)商購買。目前市場上的商用產(chǎn)品，如REMEL公司的培養(yǎng)基質(zhì)量Quanti-cultR檢查用菌種，小瓶內(nèi)每片薄膜上含有10~100CFU。此類產(chǎn)品使用簡單，但操作者需嚴格遵守供應(yīng)商的使用要求。另外，盡管所購試菌種均附有質(zhì)量證書，正式使用前，仍必須用傾注平皿法或鋪表面法等標準檢測方法對菌懸液的微生物數(shù)量進行復(fù)核確認。