培養(yǎng)基肺泡2型細(xì)胞的分離制備過程

　　1、稱體重

　　2、培養(yǎng)基腹腔內(nèi)注射本巴比妥鈉50ｍｇ/kg將大鼠處死,用酒精嚴(yán)格消毒大鼠下頜至全腹皮膚及鼠毛,剪開下頜至中腹部皮膚,打開腹腔,推開肝臟并分離出肝及膈肌間的下腔靜脈并給予切開放血。

　　3、肺血管灌洗：分離并部分橫斷切開氣管,插入連接有10ｍｌ注射器的灌洗管并用細(xì)線加以固定,在固定的離心段剪斷氣管,剪開肋骨并打開胸腔將肺和心臟提出胸腔。用20號針(另一端連接20ｍｌ的注射器)穿刺進(jìn)入右心室并順著右心室插入到肺動脈進(jìn)行肺血管的灌洗。直至左心房流出清亮液體，將肺和心臟、氣管一起取下，灌洗成功的肺呈蒼白色。

　　4、肺印片：革蘭氏染色、改良GMS染色,

　　5、支氣管灌洗：培養(yǎng)基通過注射器行支氣管肺泡灌洗,每次灌洗10ｍｌ,連續(xù)7～8次,回收40～50ｍｌ支氣管肺泡灌洗液。將BALFs離心30min(2000r/m),棄上清再混勻沉淀物，加入DMEM移入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

　　6、取不同斷面的肺組織，甲醛固定，留作切片。

　　7、胰酶消化：經(jīng)氣管注入胰酶15ml，37度水浴，消化20分鐘，間隔10min補(bǔ)加胰酶10ml.。將肺在2ml DNase中剪碎，搖床重震蕩5-10分鐘，100目————200目過濾，用顯微鏡觀察消化情況，加5ml 血清中止消化，4度，1000r/ml離心10分鐘，3mlDMEM懸浮細(xì)胞。Percoll梯度離心，DMEM洗，培養(yǎng)。

用于彎曲桿菌增菌肉湯和布氏瓊脂制備(SN標(biāo)準(zhǔn)) Brucella Broth 布氏肉湯    250
用于空腸彎曲菌的分離培養(yǎng)基培養(yǎng)(SN 、GB標(biāo)準(zhǔn)) Skirrow Agar Base,Modified 改良Skirrow氏瓊脂基礎(chǔ)     250
用于彎曲桿菌選擇性分離培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn)) Camp-BAP Agar Base,Modified 改良Camp-BAP氏瓊脂基礎(chǔ) 250
用于彎曲桿菌的TTC試驗（GB標(biāo)準(zhǔn)） TTC Agar Base TTC 瓊脂基礎(chǔ)          250
用于彎曲桿菌甘氨酸耐受性試驗（GB標(biāo)準(zhǔn)） Glycine Medium 甘氨酸培養(yǎng)基         250
用于彎曲桿菌的硫化氫試驗（GB標(biāo)準(zhǔn)） H2S Test Medium 快速硫化氫試驗瓊脂     250
用于彎曲桿菌的DNA酶水解試驗（GB標(biāo)準(zhǔn)） Dnase Agar Base with Methyl Green DNA酶甲基綠瓊脂基礎(chǔ)    100
用于彎曲桿菌的馬尿酸鈉水解試驗（GB標(biāo)準(zhǔn)） 馬尿酸鈉培養(yǎng)基 100
用于彎曲桿菌的硫化氫試驗（GB標(biāo)準(zhǔn)） 快速硫化氫(H2S)試驗瓊脂 250
用于彎曲桿菌選擇性增菌培養(yǎng)培養(yǎng)基(Merck方法) Bolton Selective Enrichment broth 波爾頓選擇性增菌肉湯 250
用于彎曲桿菌分離培養(yǎng)(WHO方法) CCDA Base CCDA基礎(chǔ) 250
每支添加于200mlCCDA基礎(chǔ)中 CCDA Supplement CCDA添加劑 2ml*10支
用于彎曲桿菌分離培養(yǎng)(FDA方法) Campy-Cefex Agar Base Campy-Cefex 瓊脂基礎(chǔ) 250
每支添加于200ml Campy-Cefex 瓊脂基礎(chǔ)中 Campy-Cefex Supplement Campy-Cefex 添加劑 2ml*10
用于蠟樣芽孢桿菌的固體平板計數(shù)（GB.SN標(biāo)準(zhǔn)） Mannitol-Egg-Yolk-Polymyxin Agar Base 甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂基礎(chǔ)（MYP）  250
用于蠟樣芽孢桿菌的MPN值測定 (SN標(biāo)準(zhǔn)) Trypticase-Soy-Polymyxin Broth Base 胰酪胨大豆多粘菌素肉湯基礎(chǔ)   250
用于蠟樣芽孢桿菌的V-P試驗(SN標(biāo)準(zhǔn)) V-P Medium,Modified 改良V-P培養(yǎng)基  250
用于蠟樣芽孢桿菌的溶血測試驗(SN標(biāo)準(zhǔn)) Trypticase Soy Sheep Blood Agar Base 胰酪胨大豆羊血瓊脂基礎(chǔ)   250
用于蠟樣芽孢桿菌的酪蛋白分解試驗  培養(yǎng)基(GB標(biāo)準(zhǔn)) Casein Agar 酪蛋白瓊脂    250
用于蠟樣芽孢桿菌葡萄糖分解試驗(SN標(biāo)準(zhǔn)) Phenol Red Dextrose Broth 酚紅葡萄糖肉湯 250