細(xì)胞培養(yǎng)基制備中硫酸銨的加入使用

    硫酸銨中常含有少量的重金屬離子，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)基有敏感作用，使用前必須用H2S處理：將硫酸銨配成濃溶液，通入H2S飽和，放置過夜，用濾紙除去重金屬離子，濃縮結(jié)晶，100℃烘干后使用。另外，高濃度的硫酸銨溶液一般呈酸性（PH=5.0左右），使用前也需要用氨水或硫酸調(diào)節(jié)至所需PH。

　　硫酸銨的加入有以下幾種方法：1）加入固體鹽法用于要求飽和度較高而不增大溶液體積的情況；2）加入飽和溶液法用于要求飽和度不高而原來溶液體積不大的情況；3）透析平衡法先將鹽析的樣品裝于透析袋中，然后浸入飽和硫酸銨中進(jìn)行透析，透析袋內(nèi)硫酸銨飽和度逐漸提高，達(dá)到設(shè)定濃度后，目的蛋白析出，停止透析。該法優(yōu)點(diǎn)在于硫酸銨濃度變化有連續(xù)性，鹽析效果好，但手續(xù)煩瑣，需不斷測(cè)量飽和度，故多用于結(jié)晶，其它情況少見。

　　使用固體硫酸銨時(shí)：1）必須注意飽和度表中規(guī)定的溫度，一般有0℃或室溫兩種，加入固體鹽后體積的變化已考慮在表中；2）分段鹽析中，應(yīng)考慮每次分段后細(xì)胞培養(yǎng)基濃度的變化。一種蛋白質(zhì)如經(jīng)二次透析，一般來說，*次鹽析分離范圍（飽和度范圍）比較寬，第二次分離范圍較窄。3）鹽析后一般放置半小時(shí)至一小時(shí)，待沉淀*后才過濾或離心。過濾多用于高濃度硫酸銨溶液，因?yàn)榇朔N情況下，硫酸銨密度較大，若用離心法需要較高離心速度和長(zhǎng)時(shí)間的離心操作，耗時(shí)耗能。離心多用于低濃度硫酸銨溶液。