酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定傷寒桿菌“O”抗體
【摘要】：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是用酶標(biāo)記的抗體（或SPA）檢測(cè)未知抗原或抗體的方法。此法敏感性高，特異性強(qiáng)。常用的是ELISA方法，間接法，雙抗體法和抗原法。本次試驗(yàn)介紹，酶聯(lián)葡萄球菌蛋白A免疫分析法。ELISA法原理如下，見(jiàn)圖9 1.加抗原使之吸附于固相載體（如塑料反應(yīng)板） 2.洗滌加待測(cè)血清 3.洗滌加酶標(biāo)記SpA 4.洗滌加酶的底物。經(jīng)酶的催化產(chǎn)生有色產(chǎn)物。 材料： 1.聚乙烯塑料反應(yīng)
相關(guān)專(zhuān)題ELISA免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是用酶標(biāo)記的抗體(或SPA)檢測(cè)未知抗原或抗體的方法。此法敏感性高，特異性強(qiáng)。常用的是ELISA方法，間接法，雙抗體法和抗原法。本次試驗(yàn)介紹，酶聯(lián)葡萄球菌蛋白A免疫分析法。ELISA法原理如下，見(jiàn)圖9
1.加抗原使之吸附于固相載體(如塑料反應(yīng)板)
2.洗滌加待測(cè)血清
3.洗滌加酶標(biāo)記SpA
4.洗滌加酶的底物。經(jīng)酶的催化產(chǎn)生有色產(chǎn)物。
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定傷寒桿菌“O”抗體
材料：
1.聚乙烯塑料反應(yīng)板(PH9.6時(shí)可吸附蛋白Ag)
2.抗原：傷寒桿菌O901煮沸或超聲波粉碎抗原
3.待測(cè)血清
4.凍干酶聯(lián)葡萄球菌A蛋白(HRD—proteinA)純品
5.鄰苯二胺(OPD)
6.包被液：0.05M碳酸鈉—碳酸氫鈉溶液PH9.6
7.稀釋液：10%免疫血清PBS—吐溫20，防止非特異性吸附
8.洗滌液：0.02MTrisTWeen20,Ph7.4防止非特異性吸附
9.底物溶液：0.02M磷酸氫二鈉25.7毫升
0.1M檸檬酸24.3毫升
蒸餾水50毫升
臨用前新鮮配制，在上述緩沖液中溶解40毫克鄰苯二胺，然后加入30%雙氧水0.15毫升，底物對(duì)光敏感，需要避光并立即使用。
10.終止液;2M硫酸
方法：
1.抗原包被
取潔凈的聚苯乙烯微量反應(yīng)板，于每孔內(nèi)加傷寒抗原0.1毫升(用包被緩沖液稀釋?zhuān)鞍缀?0微克/毫升)，置37℃1小時(shí)，棄抗原液，用洗滌液3次每次3分鐘。
2.加待測(cè)血清
于每孔內(nèi)分別加不同稀釋度(如1：5，1：10，1：20…1：80)的待測(cè)血清，PBS空白對(duì)照，陰性對(duì)照血清，陽(yáng)性對(duì)照血清各0.1毫升。置37℃30分鐘，洗滌3次。
3.加酶聯(lián)A蛋白
于每孔加酶聯(lián)A蛋白各0.1毫升，置37℃20分鐘，洗滌3次。
4.加臨時(shí)配制的底物溶液各0.1毫升，置暗處15分鐘。加2M碳酸1滴終止反應(yīng)。
5.結(jié)果判斷：(肉眼判斷)
若顏色于陰性對(duì)照相同則為陰性，若較陰性對(duì)照深則為陽(yáng)性，根據(jù)顏色深淺以(+)表示。